納米抗體，是一種重鏈抗體的可變區(qū)，其分子質(zhì)量僅為15ku，是常規(guī)抗體分子質(zhì)量的1/10。這種小型化的抗體結(jié)構(gòu)不僅保持了完整的抗原識別能力，還因其小尺寸而具有高親合力、高特異性以及強穿透性等優(yōu)勢。納米抗體制備主要涉及兩個方向：蛋白工程法和篩選制備流程。以下是對這兩個方向的詳細(xì)分析：
 

　　1.蛋白工程法
 

　　-單鏈抗體的制備：蛋白工程法是利用生物工程技術(shù)來設(shè)計和改造抗體分子的方法。納米抗體制備是通過單鏈抗體實現(xiàn)的，這涉及到將抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)通過柔性鏈接肽連接在一起，形成單鏈抗體片段。這一步驟需要準(zhǔn)確的設(shè)計和基因工程操作技術(shù)。
 

　　-噬菌體顯示技術(shù)：噬菌體顯示技術(shù)是一種有效的篩選方法。通過將納米抗體基因庫插入噬菌體載體，使其與噬菌體表面蛋白融合表達(dá)，再通過多輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”過程，高效篩選出具有高親和力和特異性的納米抗體。
 

　　-結(jié)構(gòu)優(yōu)化：在獲得初步的納米抗體后，還需要通過一系列的結(jié)構(gòu)優(yōu)化和改造工作，以提高其穩(wěn)定性、親和力和表達(dá)產(chǎn)量。這包括對抗體的CDR區(qū)域進(jìn)行精細(xì)化改造，以及通過定向進(jìn)化等技術(shù)增強其特定功能。
 

　　2.動物篩選制備流程
 

　　-免疫駱駝科動物：在篩選制備流程中，需要對駱駝科動物進(jìn)行免疫，以獲得特定的抗體產(chǎn)生細(xì)胞。這一步是制備納米抗體的基礎(chǔ)，也是確保抗體特異性的關(guān)鍵。
 

　　-構(gòu)建噬菌體文庫：從免疫后的駱駝科動物中提取RNA，通過反轉(zhuǎn)錄PCR獲得VHH基因，并將其克隆到噬菌體載體中，構(gòu)建噬菌體展示文庫。這一過程需要準(zhǔn)確的分子生物學(xué)操作技巧，以確保文庫的多樣性和質(zhì)量。
 

　　-篩選特異性納米抗體：利用目標(biāo)抗原進(jìn)行多輪篩選，從而獲得高親和力和高特異性的克隆。在這個過程中，洗滌和洗脫條件的優(yōu)化是關(guān)鍵，它直接影響篩選的效率和其性能。